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多重?zé)晒饷庖呓M化檢測

更新時(shí)間:2025-04-11

簡要描述:

多重?zé)晒饷庖叩闹饕夹g(shù)原理源自酪酰胺信號(hào)放大(TSA)技術(shù)。TSA是一種利用辣根過氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。該技術(shù)利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng),在抗原-抗體結(jié)合部位產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物。這些產(chǎn)物與周圍的蛋白殘基結(jié)合,進(jìn)而與熒光基團(tuán)結(jié)合,使得檢測信號(hào)得到幾何級(jí)放大。這種技術(shù)可與高性能染料如Alexa Fluor、傳統(tǒng)熒光染料等相兼容,實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒鈽?biāo)記。

  多重?zé)晒饷庖呓M化檢測的主要技術(shù)原理源自酪酰胺信號(hào)放大(TSA)技術(shù)。TSA是一種利用辣根過氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。該技術(shù)利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng),在抗原-抗體結(jié)合部位產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物。這些產(chǎn)物與周圍的蛋白殘基結(jié)合,進(jìn)而與熒光基團(tuán)結(jié)合,使得檢測信號(hào)得到幾何級(jí)放大。這種技術(shù)可與高性能染料如Alexa Fluor、傳統(tǒng)熒光染料等相兼容,實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒鈽?biāo)記。

  多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域:

  單細(xì)胞分析:能夠在單個(gè)細(xì)胞水平上同時(shí)檢測多種蛋白質(zhì)的表達(dá)。

  芯片分析:在生物芯片上實(shí)現(xiàn)高通量的多重蛋白質(zhì)檢測。

  組織形態(tài)和功能分析:研究組織中不同蛋白質(zhì)的空間分布和相互關(guān)系。

  腫瘤微環(huán)境分析:全景式地分析腫瘤免疫浸潤、免疫檢查點(diǎn)、腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞的空間關(guān)系等。

  自身免疫疾病分析:探究自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制和病程進(jìn)展。

  排異反應(yīng)評(píng)估:監(jiān)測和評(píng)估后的免疫排異反應(yīng)。

  多重?zé)晒饷庖呓M化檢測的大致步驟如下:

  取樣:獲取待檢測的組織樣本,通常采用切片方法。

  固定處理:用甲醛或乙醇等物質(zhì)對(duì)組織樣本進(jìn)行固定,以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。

  切片處理:將固定后的組織切成薄片,通常厚度為4-5微米。

  抗體標(biāo)記:選擇特定的抗體對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,這些抗體通常與熒光素或酶等物質(zhì)結(jié)合。

  TSA放大:利用TSA技術(shù)進(jìn)行信號(hào)放大,使熒光素在抗原-抗體結(jié)合部位大量沉積。

  染色處理:通過熒光染色方法將標(biāo)記的抗體與特定的組織細(xì)胞結(jié)合。

  圖像采集與分析:使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像,并進(jìn)行定量和定性分析。

  多重?zé)晒饷庖呓M化的圖像分析方法包括:

  定性分析:通過觀察熒光信號(hào)的分布和強(qiáng)度,判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)在組織中的表達(dá)和定位。

  定量分析:利用圖像處理軟件對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行量化,比較不同樣本或不同條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)差異。

  共定位分析:分析不同熒光信號(hào)之間的空間關(guān)系,探究蛋白質(zhì)之間的相互作用和共定位情況。

  通過這些分析方法,多重?zé)晒饷庖呓M化檢測技術(shù)能夠提供豐富的生物學(xué)信息,有助于深入理解細(xì)胞的生理和病理過程。


 

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